食品整治辦[2009]29號(hào) 各省、自治區(qū)、直轄市及新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)打擊違法添加非食用物質(zhì)和濫用食品添加劑專(zhuān)項(xiàng)整治領(lǐng)導(dǎo)小組： 　　根據(jù)《全國(guó)打擊違法添加非食用物質(zhì)和濫用食品添加劑專(zhuān)項(xiàng)整治方案》（衛(wèi)監(jiān)督發(fā)[2008]60號(hào)）規(guī)定和《全國(guó)打擊違法添加非食用物質(zhì)和濫用食品添加劑專(zhuān)項(xiàng)整治近期工作重點(diǎn)及要求》（衛(wèi)監(jiān)督發(fā)[2009]21號(hào)），全國(guó)專(zhuān)項(xiàng)整治領(lǐng)導(dǎo)小組組織制定了專(zhuān)項(xiàng)整治抽檢工作指導(dǎo)原則和專(zhuān)項(xiàng)整治國(guó)家專(zhuān)項(xiàng)抽檢工作方案，經(jīng)專(zhuān)項(xiàng)整治領(lǐng)導(dǎo)小組各成員部門(mén)同意，現(xiàn)印發(fā)給你們，請(qǐng)認(rèn)真組織實(shí)施。有關(guān)要求如下： 　　一、各省（市、區(qū)）專(zhuān)項(xiàng)整治領(lǐng)導(dǎo)小組要根據(jù)抽檢工作指導(dǎo)原則的要求，結(jié)合本地區(qū)的實(shí)際情況，制定具體的抽檢計(jì)劃并組織實(shí)施。請(qǐng)各地專(zhuān)項(xiàng)整治領(lǐng)導(dǎo)小組負(fù)責(zé)，務(wù)必于4月15日前將抽檢結(jié)果及分析評(píng)估報(bào)告報(bào)送全國(guó)專(zhuān)項(xiàng)整治領(lǐng)導(dǎo)小組辦公室。 　　二、承擔(dān)專(zhuān)項(xiàng)整治國(guó)家專(zhuān)項(xiàng)抽檢方案工作任務(wù)的各部門(mén)和檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)要加強(qiáng)協(xié)調(diào)配合，按要求采樣并將樣品送至指定檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)進(jìn)行檢驗(yàn)。檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)要按時(shí)限完成樣品檢驗(yàn)工作并將檢驗(yàn)結(jié)果通報(bào)監(jiān)督抽樣單位。 　　三、對(duì)抽檢中發(fā)現(xiàn)的違法食品生產(chǎn)經(jīng)營(yíng)行為，各地要依法予以查處，并將處理情況及時(shí)向社會(huì)公布。 　　抽檢中發(fā)現(xiàn)的問(wèn)題，請(qǐng)及時(shí)函報(bào)我辦。 　　聯(lián) 系 人：李業(yè)鵬 　　聯(lián)系電話：010-87776913 傳真：010-67711813 　　附件：1.全國(guó)打擊違法添加非食用物質(zhì)和濫用食品添加劑專(zhuān)項(xiàng)整治抽檢工作指導(dǎo)原則 　　2.全國(guó)打擊違法添加非食用物質(zhì)和濫用食品添加劑專(zhuān)項(xiàng)整治國(guó)家專(zhuān)項(xiàng)抽檢工作方案 　　3.抽檢檢驗(yàn)方法 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　全國(guó)打擊違法添加非食用物質(zhì) 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　和濫用食品添加劑專(zhuān)項(xiàng)整治 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　領(lǐng) 導(dǎo) 小 組 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　（代 章） 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　二○○九年三月二十三日 （信息公開(kāi)形式：主動(dòng)公開(kāi)） 　　附件1 全國(guó)打擊違法添加非食用物質(zhì)和濫用食品添加劑專(zhuān)項(xiàng)整治抽檢工作指導(dǎo)原則 　　為做好全國(guó)打擊違法添加非食用物質(zhì)和濫用食品添加劑專(zhuān)項(xiàng)整治（以下簡(jiǎn)稱(chēng)專(zhuān)項(xiàng)整治）抽檢工作，特制定本指導(dǎo)原則。 　　一、職責(zé)分工 　　各省專(zhuān)項(xiàng)整治領(lǐng)導(dǎo)小組負(fù)責(zé)組織各有關(guān)部門(mén)制定具體的抽檢計(jì)劃，落實(shí)各項(xiàng)工作任務(wù)，按時(shí)報(bào)送抽檢計(jì)劃和抽檢工作總結(jié)報(bào)告。 　　各部門(mén)要加強(qiáng)對(duì)各地本系統(tǒng)抽檢工作的督導(dǎo)檢查和指導(dǎo)，及時(shí)組織培訓(xùn)和質(zhì)量控制。 　　二、重點(diǎn)食品 　　乳及乳制品、米面制品、淀粉制品、豆谷制品、肉與肉制品、酒類(lèi)、水產(chǎn)品、調(diào)味品。 　　三、抽檢要求 　　（一）重點(diǎn)抽檢項(xiàng)目。重點(diǎn)抽檢項(xiàng)目為衛(wèi)生部等九部門(mén)公布的違法添加到食品中的非食用物質(zhì)及易濫用的食品添加劑的名單（第一、二批）或在食品安全監(jiān)督、監(jiān)測(cè)和舉報(bào)投訴等渠道發(fā)現(xiàn)的非法食品添加物和濫用食品添加劑。 　　（二）樣品采集的要求。 　　1、樣品采集原則為樣品應(yīng)具有代表性。應(yīng)采集不同生產(chǎn)廠家的樣品，達(dá)不到要求數(shù)量的，可以采集同一廠家但不同品牌的產(chǎn)品，仍達(dá)不到的可以選擇不同口味的產(chǎn)品。 　　2、如在銷(xiāo)售領(lǐng)域采集則本地生產(chǎn)的樣品數(shù)量不少于80%。 　　3、采集的樣品應(yīng)在保質(zhì)期內(nèi)，并考慮檢驗(yàn)時(shí)樣品在保質(zhì)期內(nèi)。 　　4、樣品采集地點(diǎn)應(yīng)考慮“添加劑”可能用在的重點(diǎn)環(huán)節(jié)，即該類(lèi)食品添加劑可能出現(xiàn)的各個(gè)監(jiān)管環(huán)節(jié)如食品原料、生產(chǎn)加工、銷(xiāo)售流通、餐飲等。 　　5、樣品的代表性還表現(xiàn)在樣品來(lái)源于大、中、小企業(yè)。因此在不同監(jiān)管領(lǐng)域樣品采集時(shí)應(yīng)考慮大中小三個(gè)層次（如大中小農(nóng)場(chǎng)；大中小食品生產(chǎn)企業(yè)；大中小商場(chǎng)超市或集貿(mào)市場(chǎng)；大中小餐飲業(yè)等），每個(gè)層次至少采集10個(gè)樣品，少于10個(gè)樣品的，全部采集。 　　（三）依法進(jìn)行樣品的采集和檢驗(yàn)。包括采集程序、采集方法、封存、儲(chǔ)存、傳遞、檢驗(yàn)等工作按照國(guó)家或地方各監(jiān)管部門(mén)頒布的監(jiān)督檢查規(guī)范、抽檢管理規(guī)定或辦法執(zhí)行。 　　四、檢驗(yàn)方法 　　檢驗(yàn)項(xiàng)目按附件指定的檢驗(yàn)方法和有關(guān)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法執(zhí)行。 　　附件2 全國(guó)打擊違法添加非食用物質(zhì)和濫用食品添加劑專(zhuān)項(xiàng)整治國(guó)家專(zhuān)項(xiàng)抽檢工作方案 　　為加強(qiáng)對(duì)重點(diǎn)食品的抽檢工作，全國(guó)專(zhuān)項(xiàng)整治領(lǐng)導(dǎo)小組決定組織部分省份相關(guān)部門(mén)和檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)開(kāi)展國(guó)家專(zhuān)項(xiàng)抽檢工作，制定本工作方案。 　　一、職責(zé)分工 　　（一）全國(guó)專(zhuān)項(xiàng)整治領(lǐng)導(dǎo)小組辦公室負(fù)責(zé)監(jiān)督抽檢方案的組織實(shí)施及結(jié)果匯總。 　　（二）各有關(guān)部門(mén)對(duì)國(guó)家專(zhuān)項(xiàng)抽檢工作進(jìn)行督導(dǎo)檢查和指導(dǎo)。 　　（三）各地專(zhuān)項(xiàng)整治領(lǐng)導(dǎo)小組負(fù)責(zé)抽檢工作組織協(xié)調(diào)及結(jié)果上報(bào)。 　　（四）具體承擔(dān)抽檢任務(wù)的單位見(jiàn)附表1。 　　二．樣品采集要求 　　1. 樣品采集地點(diǎn)見(jiàn)附表1。 　　2. 樣品采集的要求。 　　（1）樣品采集原則為樣品應(yīng)具有代表性。應(yīng)采集不同生產(chǎn)廠家的樣品，達(dá)不到要求數(shù)量的，可以采集同一廠家但不同品牌的產(chǎn)品，仍達(dá)不到的可以選擇不同口味的產(chǎn)品。采樣地點(diǎn)覆蓋省市縣且不少于3家。水發(fā)水產(chǎn)品不少于5家。 　　（2）在銷(xiāo)售流通領(lǐng)域采集樣品，本地生產(chǎn)的樣品數(shù)量不少于80%。 　　（3）采集的樣品應(yīng)在保質(zhì)期內(nèi)，并考慮檢驗(yàn)時(shí)樣品在保質(zhì)期內(nèi)。 　　（4）樣品采集量：每個(gè)食品樣品應(yīng)采集2份，每份至少500g。其中一份送檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)用于檢驗(yàn)，一份留存采樣機(jī)構(gòu)用于復(fù)檢（檢驗(yàn)有異議時(shí)）。水發(fā)水產(chǎn)品中甲醛檢驗(yàn)不復(fù)檢，可以不留樣。 　　（5）樣品保存：原料奶散裝樣品應(yīng)混勻后用滅菌容器分裝。水發(fā)產(chǎn)品用化學(xué)分析用容器分裝。取樣后在0-4℃條件下運(yùn)輸，并于18h內(nèi)送到試驗(yàn)室,如果無(wú)冷藏條件應(yīng)于采樣后4h內(nèi)檢驗(yàn)。樣品保存在-20℃條件。其他定型包裝產(chǎn)品按照樣品標(biāo)簽標(biāo)示條件進(jìn)行保存。 　　（三）樣品傳遞：采樣機(jī)構(gòu)應(yīng)派專(zhuān)人于4月1日前將樣品送到指定的檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)，并按照檢驗(yàn)規(guī)定完成樣品的接收程序。 　　（四）依法進(jìn)行樣品的采集和檢驗(yàn)，包括采集程序、采集方法、封存、儲(chǔ)存、傳遞、檢驗(yàn)等工作按照國(guó)家或地方各監(jiān)管部門(mén)頒布的監(jiān)督檢查規(guī)范、抽檢管理規(guī)定或辦法執(zhí)行。 　　（五）全國(guó)專(zhuān)項(xiàng)整治領(lǐng)導(dǎo)小組提供抽檢經(jīng)費(fèi)。 　　三、結(jié)果報(bào)送和判定 　　（一）各地專(zhuān)項(xiàng)整治領(lǐng)導(dǎo)小組于2009年4月15日前將抽檢結(jié)果（不包括結(jié)果判定）報(bào)送全國(guó)專(zhuān)項(xiàng)整治領(lǐng)導(dǎo)小組辦公室。抽檢數(shù)據(jù)匯總表（格式）見(jiàn)附表2。 　　（二）結(jié)果判定 　　各地專(zhuān)項(xiàng)整治領(lǐng)導(dǎo)小組對(duì)于具有國(guó)家限量標(biāo)準(zhǔn)的檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行判定，并對(duì)違法產(chǎn)品進(jìn)行查處。 　　對(duì)于沒(méi)有國(guó)家限量標(biāo)準(zhǔn)的項(xiàng)目，由全國(guó)專(zhuān)項(xiàng)整治領(lǐng)導(dǎo)小組專(zhuān)家委員會(huì)對(duì)結(jié)果進(jìn)行判定。 　　附表1：專(zhuān)項(xiàng)整治國(guó)家專(zhuān)項(xiàng)抽檢工作方案具體項(xiàng)目 http://www.moh.gov.cn/publicfiles/business/htmlfiles/mohwsjdj/s3594/200903/39650.htm 　　附表2：抽檢信息匯總表（格式） http://www.moh.gov.cn/publicfiles/business/htmlfiles/mohwsjdj/s3594/200903/39650.htm 　指定檢驗(yàn)方法1. 　　離子色譜法測(cè)定牛奶中硫氰酸根 　　1 原理 　　液態(tài)奶樣品沉淀蛋白、去除脂肪后，用離子色譜分析，電導(dǎo)檢測(cè)器檢測(cè)，外標(biāo)法定量。 　　2 實(shí)驗(yàn)部分 　　2.1 試劑與材料 　　2.1.1 試驗(yàn)用水均為超純水 　　2.1.2 乙腈（色譜純） 　　2.1.3 固相萃取小柱：OnGuard RP柱（2.5cc），或相當(dāng)者（如C18），使用前依次用5 ml甲醇和10 ml水活化。 　　2.1.4 硫氰酸標(biāo)準(zhǔn)品：北京化工廠 　　2.1.5 硫氰酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液 　　將硫氰酸標(biāo)準(zhǔn)品于80度烘箱內(nèi)烘干2小時(shí)。準(zhǔn)確稱(chēng)取干燥后的硫氰化鉀1.6732g于1000ml容量瓶中，定容，混勻。即得1000ppm硫氰根標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。 　　2.1.6 硫氰酸標(biāo)準(zhǔn)中間液 　　取硫氰酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液 1 mL，置于100 mL容量瓶中，加水至刻度。此溶液含硫氰酸10 mg/L。 　　2.1.7 硫氰酸標(biāo)準(zhǔn)使用液 　　移取0.1、0.2、0.5、1.0、2.0 mL硫氰酸標(biāo)準(zhǔn)中間液，用水定容于10 mL容量瓶中，濃度分別為0.1、0.2、0.5、1.0、2.0 mg/L。 　　2.2 儀器 　　2.2.1 離子色譜儀：配備淋洗液發(fā)生器和電導(dǎo)檢測(cè)器； 　　2.2.2 離心機(jī)：冷凍離心機(jī)。 　　2.3 樣品處理 取4mL液體奶樣品，加入5mL乙腈沉淀蛋白，取上清液稀釋10倍，過(guò)RP柱（或經(jīng)冷凍離心機(jī)）去除脂肪后上機(jī)。 　　2.4 離子色譜參考條件 　　色譜柱：強(qiáng)親水性陰離子交換柱。IonPac AS16，4.0×250mm分析柱；IonPac AG16，4.0×50mm保護(hù)柱；或其他相當(dāng)者。 　　流動(dòng)相：KOH溶液，梯度淋洗。淋洗液由淋洗液在線發(fā)生器在線產(chǎn)生。 KOH梯度程序如下： 時(shí)間（min） KOH濃度（mmol） 　　　　　　　　　　0 45 　　　　　　　　　　　13 45 　　　　　　　　　　13.1 70 　　　　　　　　　　　18 70 　　　　　　　　　　18.1 45 　　　　　　　　　　　23 45 　　流速：1.0 mL/min； 　　抑制器：ASRS-300型抑制器，4mm； 　　抑制器抑制模式：外接水模式，抑制電流175mA； 　　柱溫：30℃； 　　進(jìn)樣體積：100 μL。 　　3 結(jié)果計(jì)算 　　X= c*9*10/4 …………………………（1） 　　式中： 　　X——液態(tài)奶中硫氰酸的含量，單位為微克每毫升（μg/mL）； 　　c——由標(biāo)準(zhǔn)曲線得到試樣溶液中硫氰酸的濃度，單位為微克每毫升（μg/mL）； 　　9——液態(tài)奶的體積與乙腈體積之和，單位為毫升（mL）； 　　4——液態(tài)奶的體積，單位為毫升（mL）； 　　10——稀釋倍數(shù)； 　　計(jì)算結(jié)果保留兩位有效數(shù)字。 　　4 精密度 　　在重復(fù)性條件下，獲得的硫氰酸的兩次獨(dú)立測(cè)試結(jié)果的絕對(duì)差值不大于其算術(shù)平均值的5%。 　指定檢驗(yàn)方法2. 　　食品中富馬酸二甲酯殘留量的測(cè)定 　　1 范圍 本方法規(guī)定了食品中富馬酸二甲酯殘留量的GC測(cè)定方法。 　　本方法適用于糧食、糕點(diǎn)、水果等食品中富馬酸二甲酯殘留量的測(cè)定。 　　本方法的檢測(cè)限（LOD）為：25mg/kg。 　　2 規(guī)范性引用文件 　　下列文件中的條款通過(guò)本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)，然而，鼓勵(lì)根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。 　　GB/T 6682 分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法。 　　3 原理 　　樣品中富馬酸二甲酯（DMF）經(jīng)提取凈化后，用附氫火焰離子檢測(cè)器的氣相色譜儀進(jìn)行分離測(cè)定，與標(biāo)準(zhǔn)系列比較定量。 　　4 試劑和材料 　 　　4.1除非另有說(shuō)明，所有試劑均為分析純，水：GB/T 6682規(guī)定的一級(jí)水。 　　4.2氯仿。 　　4.3無(wú)水硫酸鈉。 　　4.4中性氧化鋁（層析用60-80目）。 　　4.5標(biāo)準(zhǔn)溶液貯備液：0.1g富馬酸二甲酯（含量99.9%），用少量氯仿溶解，轉(zhuǎn)移到100ml容量瓶中，用氯仿稀釋至刻度，該標(biāo)準(zhǔn)溶液含富馬酸二甲酯1mg/ml。 　　4.6標(biāo)準(zhǔn)溶液使用液：分別吸取標(biāo)準(zhǔn)溶液5、10、15、20、25、30ml于100ml容量瓶中，用氯仿稀釋至刻度，富馬酸二甲酯濃度分別為50、100、150、200、250、300ug/ml。 　　5 儀器與設(shè)備 　　5.1氣相色譜儀，附氫火焰離子檢測(cè)器。 　　5.2勻漿機(jī)。 　　5.3粉碎機(jī)。 　　6 分析步驟 　　6.1樣品制備。 　　6.1.1 糧食、糕點(diǎn)、及含水分少低脂類(lèi)的固體食品。 稱(chēng)取5.0g或10.0g粉碎樣品，置于250ml具塞三角燒瓶中，加30ml氯仿，振搖30min，用定性濾紙過(guò)濾，取10ml濾液，吹入氮?dú)馐節(jié)饪s至1ml,備用。 　　6.1.2 含脂肪較多的樣品 　　稱(chēng)取粉碎樣品10.0g，加中性氧化鋁5－10g（視脂肪多少而定），以下按6.1.1"加30ml氯仿…"起，依法操作。 　　6.1.3 水果類(lèi) 　　將水果去皮，切成碎片，加等量蒸餾水于勻漿機(jī)中勻漿后，稱(chēng)取20.0g勻漿液（相當(dāng)于10g樣品），加氯仿30ml，振搖30min，用定性濾紙過(guò)濾于125ml分液漏斗中，待分層后，用無(wú)水硫酸鈉過(guò)濾，取濾液10ml，吹入氮?dú)鉂饪s至1ml，待測(cè)。 　　6.2 測(cè)定 　　6.2.1色譜參考條件 　　a）色譜柱： 玻璃柱（內(nèi)徑3mm，長(zhǎng)2m），內(nèi)裝涂以2％OV-101和6％OV-210混合固定液的60－80目Chromosorb W.AW DMCS(HP); 　　b）氣流速度：氮?dú)?0ml/min；空氣500ml/min;氫氣35ml/min；。 　　c）溫度：氣化室及檢測(cè)器200℃,柱溫155℃。. 　　d) 進(jìn)樣量：1μL。 　　6.3.2 測(cè)定 　　注入1uL標(biāo)準(zhǔn)系列中各濃度標(biāo)準(zhǔn)使用液于氣相色譜儀中，測(cè)得不同濃度富馬酸二甲酯的峰高，以濃度為橫坐標(biāo)，相應(yīng)的峰高值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。同時(shí)注射一定體積樣品溶液，測(cè)得峰高與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較定量。 　　6.2.3 陽(yáng)性樣品的確證 　　按照上述條件測(cè)定試樣和標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，如果試樣中的質(zhì)量色譜峰保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)工作溶液一致（變化范圍在±2.5%之內(nèi)） 　　條件許可可以通過(guò)GC—MS定性 　　6.2.4 空白實(shí)驗(yàn) 　　除不稱(chēng)取樣品外，均按上述測(cè)定條件和步驟進(jìn)行。 　　6.2.5 允許差 　　在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的20%。 　　7. 結(jié)果計(jì)算 　　樣品中富馬酸二甲酯殘留量按照下式計(jì)算： 　　X：樣品中富馬酸二甲酯殘留量，mg/kg 　　A：測(cè)定樣品液中富馬酸二甲酯含量，ug/ml 　　V1：濃縮用樣品提取液體積，ml 　　V2：樣品氯仿提取液總體積，ml 　　V3：樣品濃縮后的體積，ml 　　V4：標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣體積，ul 　　V5：樣品溶液進(jìn)樣體積，ul 　　m：樣品重量，g 　　8. 相關(guān)技術(shù)參數(shù) 　　方法最低檢出限：25mg/kg。回收率在88.9％～94.2%范圍內(nèi)，其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在4.32％～9.07％的范圍內(nèi)。 　　指定檢驗(yàn)方法3-1. 　　辣椒粉中堿性橙、堿性玫瑰精、酸性橙Ⅱ及酸性黃的測(cè)定 　　——液相色譜 　　1 原理 　　試樣中的目標(biāo)化合物用乙腈-水（7－3）提取，用高效液相色譜C18柱分離，紫外檢測(cè)器檢測(cè)，外標(biāo)法定量。 　　2 實(shí)驗(yàn)部分 　　2.1 儀器與試劑 　　高效液相色譜儀，配備有Waters-Allains2695泵控及自動(dòng)進(jìn)樣系統(tǒng)，以及Waters-2996二極管陣列檢測(cè)器；離心機(jī)；超聲震蕩器。 　　甲醇（色譜純，迪馬公司） 　　乙腈（色譜純，迪馬公司） 　　試驗(yàn)用水均為超純水 　　乙酸銨（分析純） 　　無(wú)水乙酸（分析純） 　　標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的配制：準(zhǔn)確稱(chēng)取0.0100g酸性黃、酸性橙Ⅱ、堿性橙、堿性玫瑰精標(biāo)準(zhǔn)品于10mL棕色容量瓶中，用甲醇醇溶解并定容至體積。 　　標(biāo)準(zhǔn)使用液：分別吸取1.0mL酸性黃、酸性橙Ⅱ、堿性橙、堿性玫瑰精的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液到10mL容量瓶中用水定容至刻度為中間使用液，再分別取0.1、0.5、1.0、2.0、5.0mL中間使用液到1mL容量瓶中用水定容至刻度，四種組分的標(biāo)準(zhǔn)系列為：1、5、10、20、50μg/mL. 　　提取液：乙腈/水=7/3 　　2.2 液相色譜參考條件 色譜柱：Inertsil ODS-3 4.6×250mm，5μm； 　　流動(dòng)相：A:乙腈；B：10mM乙酸銨水溶液（乙酸0.12％） 　　梯度洗脫： A B 　　0min： 30 70 14min： 82 18 15min 82 18 16min 30 70 　　波長(zhǎng)：酸性黃、酸性橙Ⅱ、堿性橙450nm；堿性玫瑰精550nm 　　流速：1.0mL/min；柱溫：35℃；進(jìn)樣體積：20μL。 　　2.3 樣品處理 　　準(zhǔn)確稱(chēng)取2～5g樣品于50mL塑料離心管中，加入10mL提取液，超聲提取20min后，以1000轉(zhuǎn)/h離心10min，取20μL液相色譜測(cè)定。 　　3 結(jié)果計(jì)算 　　分別取標(biāo)準(zhǔn)和樣品各20μL進(jìn)樣，HPLC測(cè)定，外標(biāo)法定量。 　 　　C：樣品中待測(cè)組分的含量，μg/g； 　　c：樣品中待測(cè)組分的測(cè)定濃度，μg/mL； 　　W：樣品重量，g。 　　指定檢驗(yàn)方法3-2. 　　辣椒粉中堿性橙、堿性玫瑰精、酸性橙Ⅱ及酸性黃的測(cè)定 　　——液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法 　　1 原理 　　試樣中的目標(biāo)化合物用甲醇-乙酸銨溶液提取，經(jīng)弱陰離子交換固相萃取柱凈化后，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定，基質(zhì)加標(biāo)工作曲線外標(biāo)法定量。 　　2 試劑與材料 除另有規(guī)定外，所有試劑均為分析純，實(shí)驗(yàn)用水為超純水。 　　2.1 甲醇：液相色譜純 　　2.2 乙酸銨 　　2.3 甲酸 　　2.4氨水 　　2.5 提取溶液：稱(chēng)取3.9克乙酸銨用水溶解，加入10.0 mL 甲酸，用水定容到500 mL后，用甲醇定容到1000 mL。 　　2.6 固相萃取柱平衡溶液：稱(chēng)取3.9克乙酸銨用水溶解，加10.0 mL甲酸，用水定容到500mL。 　　2.7 淋洗溶液：稱(chēng)取3.9克乙酸銨用水溶解，加10.0 mL甲酸和25.0mL甲醇，用水定容到500mL。 　　2.8 洗脫溶液：取5mL氨水用甲醇定容至100mL。 　　2.9 樣品稀釋液：稱(chēng)取0.39克乙酸銨用水溶解，加0.50 mL甲酸，用水定容到250mL后，用水定容到500mL。 　　2.10 流動(dòng)相A：稱(chēng)取0.39克乙酸銨用水溶解，加0.50 mL甲酸，用水定容到500mL。 　　2.11 流動(dòng)相B：乙腈，液相色譜純。 　　2.12 弱陰離子交換固相萃取柱：WAX，60mg/3mL，使用前依次用3mL甲醇、3mL水以及3mL固相萃取柱平衡溶液（2.5）活化。 　　2.13 標(biāo)準(zhǔn)品：堿性橙、堿性玫瑰精、酸性橙Ⅱ和酸性黃 。 　　2.14 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（1.0 mg/mL）：準(zhǔn)確稱(chēng)取0.0100克堿性橙、玫瑰精、酸性橙Ⅱ和酸性黃標(biāo)準(zhǔn)品，用50%甲醇水溶液定容至10.0mL。 　　2.15 標(biāo)準(zhǔn)系列：配制堿性橙、玫瑰精、酸性橙Ⅱ和酸性黃混合標(biāo)準(zhǔn)系列，堿性橙、酸性橙Ⅱ和酸性黃濃度為：0.4、0.8、2.0、3.2、4.0μg/mL；玫瑰精標(biāo)濃度為：10.0、20.0、50.0、80.0、100.0 ng/mL。 　　3 儀器和設(shè)備 　　3.1 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀：配有電噴霧（ESI）離子源。 　　3.2 離心機(jī)。 　　3.3 超聲波水浴。 　　3.4 固相萃取裝置。 　　3.5 氮吹儀。 　　4 樣品及基質(zhì)加標(biāo)工作曲線的制備 　　4.1 樣品的制備 a）提取 稱(chēng)取1.0克試樣于50mL離心管中，加入10.0mL提取溶液，超聲提取30分鐘，10 000 r/min 離心10分鐘，上清液轉(zhuǎn)移至另一50mL離心管中；殘?jiān)屑尤?0.0mL提取溶液再次提取，合并兩次提取溶液。 　　b）凈化 　　取5.0mL樣品提取液，用固相萃取柱平衡溶液（2.5）稀釋定容至50.0mL，過(guò)已活化好的弱陰離子固相萃取柱，用2mL淋洗液、2mL水淋洗，5mL洗脫液洗脫，收集洗脫液，用氮?dú)獯抵两桑脴悠废♂屢憾ㄈ葜?.0mL，過(guò)0.22μm濾膜后液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定。 　　4.2 基質(zhì)加標(biāo)工作曲線的制備 稱(chēng)取1.0克空白樣品基質(zhì)于50mL離心管中， 稱(chēng)取6份，分別加入標(biāo)準(zhǔn)系列溶液（2.15）100μL，按4.1進(jìn)行操作，制備基質(zhì)加標(biāo)工作曲線，堿性橙、酸性橙Ⅱ和酸性黃濃度為：10.0、20.0、50.0、80.0、100.0 ng/mL；玫瑰精濃度為：0.25、0.5、1.25、2.0、2.5 ng/mL。 　　5 測(cè)定 　　5.1 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜參考條件 　　色譜柱：BHT 1.7μm×100mm 　　流動(dòng)相：A: 含0.1%甲酸的5mmol/L乙酸銨水溶液； B: 乙腈。 　　　梯度洗脫 　　Time 　Flow（mL/min） 　A（%） 　B（%） 　0 　0.3 　90 10 5 0.3 10 90 6 0.3 10 90 6.5 0.3 90 10 10 0.3 90 10 　　進(jìn)樣量：5μL 。 　　柱溫：40℃ 。 　　離子源：堿性橙、堿性玫瑰精，電噴霧ESI，正離子；酸性橙Ⅱ、酸性黃，電噴霧ESI，負(fù)離子。 　　掃描方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)MRM。 　　監(jiān)測(cè)離子對(duì)： 　　組分 　錐孔電壓（v） 　碰撞能量（ev） 　　母離子（m/z） 　　子離子（m/z） 堿性橙 38 20 212.8 76.5、120.6 堿性玫瑰精 70 40 433.2 399.2、355.1 酸性橙Ⅱ 40 40 327.0 155.9、79.8 酸性黃 50 30 352 155.9、79.7 　　5.2 定性測(cè)定 　　各檢測(cè)目標(biāo)化合物以保留時(shí)間和兩對(duì)離子的（特征離子對(duì)/定量離子對(duì)）所對(duì)應(yīng)的LC-MS/MS色譜峰面積相對(duì)豐度進(jìn)行定性。要求被測(cè)試樣中目標(biāo)化合物的保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)溶液中目標(biāo)化合物的保留時(shí)間一致（一致的條件是偏差小于20%），同時(shí)要求被測(cè)試樣中目標(biāo)化合物的兩對(duì)離子對(duì)應(yīng)LC-MS/MS色譜峰面積比與標(biāo)準(zhǔn)溶液中目標(biāo)化合物的面積比一致，相對(duì)豐度>50%、20-50%、10-20%、